Caracterización bioquímica de la proteína fosfatasa 2A de Mytilus chilensis (Bivalvia, Mollusca) /
Rivas Alvarez, Mariella
Caracterización bioquímica de la proteína fosfatasa 2A de Mytilus chilensis (Bivalvia, Mollusca) / Mariella Rivas Álvarez. - xvi, 87 hojas : ilustraciones, gráficos, tablas.
Bibliografía : hojas 79-87.
En esta Tesis se purifica y se caracteriza la proteína fosfatasa 2A (PP2A) de Mytilus chilensis. Esta enzima es inhibida específicamente por las toxinas que componen el Veneno Diarreico de Moluscos (VDM) y también por las hepatotoxinas, denominadas rnicrocistinas, las cuales son producidas por cianobacterias. Se determinaron las condiciones óptimas para su actividad: pH, fuerza iónica y dependencia de cationes divalentes y se estudió su estabilidad. Además, se determinaron las constantes cinéticas de su reacción: constante de Michaelis-Menten (Km) y velocidad máxima (Vmáx). Esta enzima se encuentra formada por tres subunidades: una de 62 Kda que correspondería a la subunidad reguladora, otra de 58 Kda que sería la subunidad B y por último, una de 28 Kda que debería ser la subunidad catalítica. Esto fue demostrado utilizando Cromatografía Líquida de Alta Resolución de separación por tamaño (HPLC size exclusion) y mediante Electroforesis en Geles de Poliacrilamida con detergente aniónico, dodecil sulfato de sodio (SDS-PAGE). De las cinéticas de inhibición, se determinaron los Ic50para los inhibidores específicos de PP2A de M chilensis siendo estos 0,25 ng·ml¯¹ , 2 ng·ml¯¹ y 0,8 ng·ml¯¹ para Microcistina-LR, Ác. O.kadaico y -Dinophysis Toxina-.1, respectivamente. Se realizaron las curvas de calibración para cada una de estas toxinas, demostrándose que el ensayo de inhibición de la actividad de esta enzima sirve para la detección y cuantificación de estas toxinas. Adicionalmente, se dan evidencias de que el ensayo enzimático detecta las toxinas del VDM lo cual se confirma por HPLC.
BIOQUIMICA
CARACTERIZACION BIOQUIMICA
MYTILUS CHILENSIS
Caracterización bioquímica de la proteína fosfatasa 2A de Mytilus chilensis (Bivalvia, Mollusca) / Mariella Rivas Álvarez. - xvi, 87 hojas : ilustraciones, gráficos, tablas.
Bibliografía : hojas 79-87.
En esta Tesis se purifica y se caracteriza la proteína fosfatasa 2A (PP2A) de Mytilus chilensis. Esta enzima es inhibida específicamente por las toxinas que componen el Veneno Diarreico de Moluscos (VDM) y también por las hepatotoxinas, denominadas rnicrocistinas, las cuales son producidas por cianobacterias. Se determinaron las condiciones óptimas para su actividad: pH, fuerza iónica y dependencia de cationes divalentes y se estudió su estabilidad. Además, se determinaron las constantes cinéticas de su reacción: constante de Michaelis-Menten (Km) y velocidad máxima (Vmáx). Esta enzima se encuentra formada por tres subunidades: una de 62 Kda que correspondería a la subunidad reguladora, otra de 58 Kda que sería la subunidad B y por último, una de 28 Kda que debería ser la subunidad catalítica. Esto fue demostrado utilizando Cromatografía Líquida de Alta Resolución de separación por tamaño (HPLC size exclusion) y mediante Electroforesis en Geles de Poliacrilamida con detergente aniónico, dodecil sulfato de sodio (SDS-PAGE). De las cinéticas de inhibición, se determinaron los Ic50para los inhibidores específicos de PP2A de M chilensis siendo estos 0,25 ng·ml¯¹ , 2 ng·ml¯¹ y 0,8 ng·ml¯¹ para Microcistina-LR, Ác. O.kadaico y -Dinophysis Toxina-.1, respectivamente. Se realizaron las curvas de calibración para cada una de estas toxinas, demostrándose que el ensayo de inhibición de la actividad de esta enzima sirve para la detección y cuantificación de estas toxinas. Adicionalmente, se dan evidencias de que el ensayo enzimático detecta las toxinas del VDM lo cual se confirma por HPLC.
BIOQUIMICA
CARACTERIZACION BIOQUIMICA
MYTILUS CHILENSIS