Caracterización de la infección viral en cepas de la microalga Emiliana huxleyi (Lohmann) / Cristopher Rojas Lorca.

Incluye anexos.

Título profesional Biólogo Marino. Universidad de Valparaíso. 2021.

Bibliografía: hojas 70-78.

La microalga Emiliania huxleyi (Lohmann) es un cocolitoforido pelágico abundante y ampliamente distribuido en todo el planeta, conocido por su capacidad de formar extensas floraciones y por su gran importancia en los ciclos biogeoquímicos del carbono y azufre principalmente. En ocasiones estas floraciones son terminadas por la acción de virus específicos que infectan a esta microalga, se les conoce como Coccolithovirus y tienen ADN bicatenario grande (dsDNA) y son específicamente denominados virus Emiliania huxleyi o EhV. Estos virus lisan las células después de 1 a 5 días de haber infectado a los cocolitofóridos. El objetivo general de este estudio fue caracterizar los ciclos de infección de virus que infectan a diferentes cepas de la microalga Emiliania huxleyi. Se realizaron 2 tratamientos utilizando diferentes antibióticos con el objetivo de obtener un cultivo axénico de alguna de las cepas de la microalga, para obtener un lisado puro libre de bacterias y así optimizar los resultados de la caracterización de los virus, objetivo que no fue posible cumplir ya que exámenes con microscopia de epifluorescensia revelaron la presencia de bacterias en los resultados de ambos tratamientos. Mediante microscopia electrónica de transmisión se determinó la forma y tamaño de una partícula con forma de virus, la cual es probable que sea un representante del virus EhV -C2, previamente aislado en el Laboratorio de Virología. Se buscó también aislar nuevos agentes infecciosos desde muestras de agua de mar provenientes de la bahía de Valparaíso obteniendo un resultado de lisis positivo con una de las muestras provenientes de agua superficial proveniente de la Playa Las Torpederas, sin embargo, no se prosiguió con la propagación del agente lítico, que posiblemente no fuese un virus en este caso. Los resultados con el aislado y muestras de agua locales se compararon con la infección del virus Ehv-163 aislado en el fiordo de Noruega, para lo cual se probó el rango de infección viral del virus EhV-163 infectando todas las cepas de microalgas disponibles en el laboratorio obteniendo resultados variados desde cepas que presentaron una alta resistencia a la infección y valores de tasa de crecimiento muy bajos tales como las cepas SEPA194, SEPA793, SEPA794, SEPA795, SEPA 800 y SEPA801 y en contraste cepas que presentaron una respuesta inmediata a la infección, con elevados porcentajes tanto de mortalidad como de tasa de crecimiento como fueron las cepas SEPA798, SEPA797, CCMP374, CCMP2090 y CCMP3266. Se realizaron experimentos de Número más probable con los lisados resultantes del experimento de rango de infección de cada cepa para así determinar la concentración de partículas virales presentes en cada uno, destacando las cepas CCMP374 con una concentración de 4 x 10^7, CCMP2090 con una concentración de 3 x 10^9, CCMP3266 con un valor de 6 x 10^3 y la cepa SEPA 797 con una concentración 6 x 10^3 partículas por mL. Luego se caracterizó el ciclo de infección lítico de algunas cepas comparando la cinética de infección de cepas con diferencias significativas en cuanto a infectividad, cepas de infección rápida (SEPA307, SEPA797 y CCMP374) y lenta (SEPA184 y SEPA802). Obteniendo como resultado que las microalgas posiblemente desarrollen algún mecanismo de defensa posterior a la infección. Finalmente, para corroborar la presencia y cantidad de material genético viral en los lisados virales de cada cepa y comparar los resultados, se realizó un PCR en tiempo real (qPCR) demostrando que existía la presencia de material genético perteneciente al virus EhV163 en cada una de las muestras obtenidas de los lisados resultantes del experimento de rango de infección. Concluyendo que ya que no se pudo cumplir el objetivo de generar un cultivo axénico, se apunte a investigaciones futuras a cumplir con esto con el fin de obtener lisados puros libres de bacte1ias y así optimizar los resultados en una posible caracterización del virus EhV-C2 y otros EhVs. Así también continuar en el estudio de los mecanismos de defensa que las microalgas utilicen ya sea antes o posterior a la infección.