Validación de un método analítico para la determinación de concentraciones plasmáticas de voriconazol mediante HPLC y estandarización de la técnica PCR - RFLP para la detección del poliformismo / Joan Alejandro Galdames Briceño.

Químico Farmacéutico.

El voriconazol es un antifúngico de amplio espectro, con efectividad sobre microorganismos como Aspergillus y Cándida. En la práctica clínica, se ha observado que el tratamiento con voriconazol presenta una farmacocinética variable intra e interindividual encontrándose que un alto porcentaje de los niños, tratados con dosis estándar, presentan niveles plasmáticos sub-terapéuticos, requiriendo de un aumento de las dosis para alcanzar concentraciones terapéuticas. Este fenómeno se ha asociado a la presencia de polimorfismos genéticos implicados en el metabolismo de fármacos. Los polimorfismos de nucleótido simple (SNP) en el gen que codifica para la enzima metabolizadora CYP2C19 (CYP2C19*1), se han asociado a variaciones en la farmacocinética del voriconazol. Para estudiar estas variaciones es necesario implementar técnicas de última generación, que permitan realizar un monitoreo terapéutico desde el punto de vista farmacocinético y farmacogenético. Para los estudios de farmacocinética, la Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC) es la técnica de referencia para determinar los niveles plasmáticos de voriconazol, capaz de entregar resultados confiables y precisos. Para el caso de la farmacogenética, la técnica de PCR-RFLP (Polymerase Chain Reaction–Restriction Fragment Lenght polymorphism), es la técnica de elección para la detección de SNPs. En este trabajo de tesis, en el hospital Dr. Luis Calvo Mackenna se implementaron las técnicas de HPLC y PCR-RFLP para determinar los niveles plasmáticos de voriconazol y polimorfismos genéticos asociados al metabolismo de este fármaco, respectivamente. Para la técnica HPLC, se realizó la validación analítica incluyendo los parámetros de especificidad, límite de detección (0.03 µg/mL), límite de cuantificación (0.09 µg/mL), linealidad (r2 = 0.9988), exactitud (recuperación = 101.6%), precisión (coeficiente de variación ≤ 2%) y robustez. Además, se implementó la técnica de PCR-RFLP para la detección del SNP CYP2C19*17, un SNP asociado a concentraciones sub-terapéuticas de voriconazol. La implementación de estas dos técnicas permitirá en el futuro realizar estudios de farmacocinética y farmacogenética destinados optimizar el tratamiento con voriconazol.