Diferenciación celular miogénica en la línea celular C2C12 en cultivos monocapa y en matrices poliméricas tridimensionales libres de componentes de origen mamífero / Gonzalo Javier Morales Bastías.

Química y Farmacia.

Las dietas que excluyen nutrientes obtenidos mediante el sacrificio de animales están siendo adoptados por parte de la población y cada día poseen más adherentes. Sin embargo, éstos podrían afectar el funcionamiento fisiológico del ser humano si es que estos son muy extremos o no se complementan con proteínas vegetales, alimentos funcionales o nutra-fármacos. En una dieta balanceada, la presencia y consumo de proteína es esencial, por lo que surge la necesidad de suplir esta falta del macronutriente, respetando la ideología adoptada. Así nace la idea, basada en la ingeniería de tejidos, de producción in vitro de carne, utilizando la menor cantidad posible de componentes animales, específicamente mamíferos, y así su obtención no esté asociada al sufrimiento animal. Para contribuir en la producción de los productos antes señalados, esta tesis se planteó como objetivo el comparar la diferenciación de mioblastos C2C12 hacia linaje muscular avanzado en situaciones de cultivo en monocapa y matrices poliméricas tridimensionales lisas o microestructuradas libres de componentes mamíferos, a través de la expresión de transcritos de desmina, miogenina y cadena pesada de miosina. Para alcanzar este objetivo se sembraron células C2C12 en matrices poliméricas compuestas de gelatina, alginato, agarosa y sorbitol, de estructuras lisas y microestructuradas, y en condición de cultivo en monocapa. Todas las anteriores fueron cultivadas en condiciones de diferenciación miogénica para comparar la expresión de marcadores de diferenciación muscular mediante reacción de PCR en tiempo real acoplada a transcripción reversa. Las matrices poliméricas lisas o microestructuradas fueron compatibles con la línea celular C2C12, pero no permitieron una óptima extracción de ARN. Sin embargo, la línea celular en cultivo monocapa presentó diferenciación con expresión de marcadores musculares de diferenciación ya que, al séptimo día se detectó expresión de desmina, miogenina y de cadena pesada de miosina, marcadores de diferenciación temprana, media y tardía. En conclusión, esta investigación permitió implementar la metodología molecular para evaluar diferenciación muscular.